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猪精液质量检测方法|猪精液收集后应该怎们保存

文章出处:网责任编辑:作者:人气:-发表时间:2017-08-10 15:36:00

一、化验室准备工作


  提前制作好稀释液:采精一个半小时前用量杯量取1000毫升双蒸馏水,放入37度恒温水浴锅内,预热20分钟后再加入稀释粉(这样更利于稀释粉的溶解)。

  用玻璃棒或借用磁力搅拌器对其搅拌至完全溶解后,再放入水浴锅内预热一小时以上,待稀释液ph值和渗透压达到最稳定状态后方可使用(稀释液的ph值通常在5.5--6.5。猪精子细胞渗透压290--300 mOsm/kg,一般稀释液渗透压在250--300 mOsm/kg范围内不会对精子造成影响)。

  打开恒温电热板并预热载玻片(温度设置为37度);

  打开空调制热使化验室内温度在25度以上,以防止精液在稀释过程中散失大量的热。

  二、精液品质评定

  由传送窗口递交过来的精液,应立刻对其品质进行检测评定。目前,常用的检查标准包括精液量、颜色、精子活率、形态与密度,气味、ph值等。

  精液量:精液量可以通过倒入量杯内量取,但此法较繁杂。可使用电子秤对其称重(1克=1毫升)从而计算出精液的容积。

  一般来说,公猪正常的射精量范围为150--350毫升。当然,有些公猪的射精量可达600毫升以上。也有个别射精量低于150毫升的公猪,但其密度一般会较高。精液量的多少与其品种、年龄、采精间隔、饲养管理水平等相关。

  颜色:正常为浅灰色或者乳白色,一般来说密度较大的精液会呈浅灰色,乳白色次之。但精液颜色越淡则表示其密度越小。但凡发现精液颜色异常,应弃之不用,查找导致如此的原因,加以解决。

  气味:正常为公猪精液特有的微腥味。异味者,应弃之。

  ph值:正常呈现弱碱性或中性,一般是7.0--7.8。有趣的是,精液的密度与其相关。相对而言,精液的密度越大,ph值越接近中性;反之,ph值就就趋于弱碱。

  精子活率:指精液中呈直线前进运动精子数占总精子数的百分比。它与授精能力密切相关,也是评定精液品质的重要指标。

  常用的方法是通过显微镜对运动精子的进行视觉评定,但此法准确率很大程度上取决于化验员的经验与技术水平。

  在实践中评定精子的活率我们常采用“10级制直线运动评定法”。即在显微镜下观察一个视野内的精子运动,如果精子全部呈直线运动,则为1.0级。如果90%的精子呈直线运动,则为0.9级,如果80%的精子呈直线运动则为0.8级,以此类推。

  在这里,本作者要特别强调一点的是:移取少量精液于载玻片后,如果不加盖玻片所评定精子活率标准应是:“10级制精子漩涡式运动评定法”—1.0级,在视野中精子全部呈涡式运动;0.9级,视野中90%的精子呈涡式运动;0.8级,视野中80%的精子呈涡式运动;以此类推。一般0.7级以上的涡式运动给予视觉感官上最为明显,0.7级以下则逐级次之。

  精子活率要在70%以上时,精液才能使用。因为精子活力在保存的过程中会有所下降。

  密度:指每毫升精液所含有的精子数量,它不仅是衡量精液品质好坏的重要指标之一,还是确定精液所稀释倍数的参照标准。一般我们会借助精液密度仪或白细胞计数板对其进行测定。正常猪精液密度为4--6亿/毫升,甚至有些个体的精液密度达到8亿/毫升。而并非书本上提及的“2--3亿/毫升”!

  形态:主要评定畸形精子。正常的精子形态如蝌蚪。而畸形的精子包括巨头、双头、双尾、断尾、卷尾、弯尾、有头无尾、顶体脱落、有原生质滴和许多其他不正常的形态。精子形态是否正常关系到受精率。我们一般使用商业染色剂对其染色后,通过显微镜进行检查。一般正常猪精液的畸形率不会超过18%。
 
  三、稀释精液

  评定完精液品质结束后,应立即把盛装精液的集精袋转入水浴锅中预热,使其温度与稀释液的温度一致,方能做到等温稀释,温度公差尽量不要超过1度。

  待两者温度一致后便要进行稀释。方法为应先将精液容量二分之一的稀释液沿集精袋璧缓慢加入,然后轻轻摇动集精袋使其混合均匀。为防止精子受到“温柔的稀释伤害”,应在低倍稀释后给予精子3分钟左右的适应过程。然后镜检,合格后再按照需求做高倍稀释。
  (注:整个稀释过程中,精液最好不要拿离水浴锅,以保证与稀释液的温度一致)

  稀释倍数的确定

  稀释的比例在制作精液中非常重要。我曾提出的新理念说过每一头公猪的精液都有其一个适宜的稀释倍数。这个稀释倍数受许多因素影响,或者说确定稀释倍数我们应考虑诸多方面。

  比如说:精液(精液量、密度、活力、精子个体形态等);
  稀释液(起始ph值、缓冲能力、渗透压等);
  其它(需求份数、精液稀释后需储存的时间等)。

  猪仙子建议,一个理想的精液稀释倍数介于1:3--1:8。但应注意的是高倍稀释比低倍稀释更容易出现问题,因为高比例稀释会影响精子的活率,同时还会削弱精清对精子完整性的保护作用。

  目前为止,还没有一个要求每剂精液中最低精子数的标准。但现在生产中,理论上讲及技术员们更热衷于把每剂精液中的精子数控制在30--50亿的范围内。

  猪仙子建议,如果非要以每剂精液中的精子数来确定稀释倍数的话,最好把每剂精液中的精子数量做到50亿/剂。

  其稀释方法为:首先确定原精中总活精子数,再计算出原精可分装的头份,继而确定需添加稀释液的量。原精中总活精子数=原精量X密度X活力;可分装的头份=原精中总活精子数÷每剂精液要求精子数;需添加稀释液的量=可分装的头份X剂量—原精量。

  四、精液的分装

  精液的包装分为瓶装与袋装两种。瓶装的精液分装时简单方便,易于操作,但输精时需人为挤压;

  相对于瓶装精液,袋装精液可能具有一定优势。 比如,在储存时呈扁平状的精液袋,可更好的使精子与营养液充分接触,以减少精液沉淀,从而更有利于精子的保存;

  在生产中袋装精液也可配合悬挂式输精,以减少劳动耗费,从而提高配种效率。但袋装精液在分装时需要专门的精液灌装机,这就意味着比瓶装精液的方式多出额外的投入。

  分装完毕后。应在袋/瓶身注明公猪品种、耳号。对于商业化公猪站来说,除公猪品种和耳号外,还要注明制精时间、稀释后的精液密度、活力、经手人等。

  五、精液的储存

  分装完毕后的精液应用毛巾包裹,置室温下40--60分钟后,待分装后的精液温度接近17度时,再转放入17度的恒温箱内。在这,我可以负责任的讲,精液分装完毕后,直接放入恒温箱内也是可以的,其对精子的影响很小。但是,即能把控细节做到最好,那为什么不呢?

  一个错误的储存方式必然会对精液的质量产生不良的影响。

  在使用17度恒温箱时需注意的是:

  恒温箱内不要放置过多的精液或者稀释粉等杂物,否则会影响恒温箱内的热循环,以免导致温度上下不均匀;

  精液最好不要放在温感探头附近,不然温感探头测得的温度会与恒温箱内的实际温度有所差异,以免导致多度制冷或者加热致使恒温箱内温度的紊乱;

  不要在小风扇附近放置它物,不然阻挡恒温箱内的空气循环,导致箱内温度的不均匀。;

  在储存过程中每间隔12小时,应轻柔的将精液晃动一次,以避免精子因沉淀失去养分而死亡。
 
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